| 種屬 | 小鼠 |
| 組織來(lái)源 | 垂體 |
| 生長(zhǎng)特性 | 貼壁細(xì)胞 |
| 細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
| 生長(zhǎng)培養(yǎng)基 | DMEM/F12(PM150312)＋10% HS(164215-100)＋2.5% FBS(164210-500)＋2ng/ml FGF＋0.45% Glucose＋2.85g/L Sodium Bicarbonate＋1% P/S(PB180120) |
| 推薦傳代比例 | 1:2-1:4 |
| 推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
| 凍存條件 | 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO溫度：液氮 |
| 培養(yǎng)條件 | 氣相：空氣，95%；CO2，5%溫度：37℃ |
* Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.
| Characteristics | |
| Karyotype | This is a hypotriploid human cell line. The modal chromosome number was 64, occurring in 30% of cells. The rate of cells with higher ploidies was 4.2 %. The der(1)t(1;15) (q42;q13), der(19)t(3;19) (q12;q13), der(12)t(8;12) (q22;p13), and four other marker chromosomes were common to most cells. Five other markers occurred in some cells only. The marker der(1) and M8 (or Xq+) were often paired. There were four copies of N17 and N22. Noticeably in addition to three copies of X chromosomes, there were paired Xq+, and a single Xp+ in most cells. |
| Virus Susceptibility | － |
| Derivation | － |
| Clinical Data | － |
| Antigen Expression | － |
| Receptor Expression | Vitronectin, expressed |
| Oncogene | － |
| Genes Expressed | － |
| Gene expression databases | － |
| Metastasis | － |
| Tumorigenic | Yes |
| Effects | Yes, forms tumors in nude mice |
| Comments | Although an earlier report suggested that the cells contained Adenovirus 5 DNA from both the right and left ends of the viral genome, it is now clear that only left end sequences are present. The cells express an unusual cell surface receptor for vitronectin composed of the integrin beta－1 subunit and the vitronectin receptor alpha－v subunit. The Ad5 insert was cloned and sequenced, and it was determined that a colinear seqment from nts 1 to 4344 is integrated into chromosome 19 (19q13.2). |
| Culture Method | |
| Doubling Time | － |
| Methods for Passages | Wash by PBS once then 0.05% trypsin-EDTA solution and incubate at room temperature (or at 37ºC), observe cells under an inverted microscope until cell layer is dispersed (usually within 1 to 5 minutes) |
| Medium | DMEM (high glucose)+10% FBS |
| Special Remarks | － |
| Medium Renewal | Every 2 to 3 days |
| Subcultivation Ratio | 1:6 to 1:10 weekly |
| Growth Condition | 95% air + 5% CO2, 37ºC |
| Freeze medium | DMEM (high glucose)+20% FBS+10% DMSO，也可以訂購(gòu)細(xì)胞凍存液(C0210)。 |
本細(xì)胞株經(jīng)過(guò)支原體檢測(cè)(Mycoplasma Test)，檢測(cè)結(jié)果為陰性。
本細(xì)胞株通過(guò)STR (short tandem repeats)鑒定，具體結(jié)果如下：
| AMEL | D16S539 | D7S820 |
 |  |  |
| D5S818 | THO1 | TPOX |
 |  |  |
| vWA | D13S317 | CSF1PO |
 |  |  |
本細(xì)胞株的培養(yǎng)圖片如下：
包裝清單：
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| C6002 | 293 (人胚腎細(xì)胞) | 1支/瓶 |
| — | 說(shuō)明書(shū) | 1份 |
保存條件：
對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)瓶或離心管運(yùn)輸?shù)幕罴?xì)胞，室溫3-5天有效。對(duì)于干冰運(yùn)輸?shù)膬龃婕?xì)胞，液氮保存，長(zhǎng)期有效；-80ºC保存，2個(gè)月有效。
注意事項(xiàng)：
本細(xì)胞株未經(jīng)書(shū)面許可不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人所在實(shí)驗(yàn)室外的任何個(gè)人或單位。使用者在發(fā)表研究論文或結(jié)果時(shí)，應(yīng)注明細(xì)胞株的來(lái)源。
本細(xì)胞株相關(guān)資料參考ATCC (American Type Culture Collection)、DSMZ (German Collection of Microorganisms and Cell Cultures)、JCRB (Japanese Collection of Research Bioresources Cell Bank)、Cellosaurus (Swiss Institute of Bioinformatics)等網(wǎng)站信息，并結(jié)合實(shí)際培養(yǎng)信息綜合而成。由于細(xì)胞培養(yǎng)的條件、代數(shù)等因素，實(shí)際細(xì)胞可能與本說(shuō)明書(shū)提供的信息有一定的差異，具體以實(shí)際細(xì)胞為準(zhǔn)。
STR結(jié)果可以與ATCC、DSMZ及中國(guó)國(guó)家實(shí)驗(yàn)細(xì)胞資源共享平臺(tái)等網(wǎng)站的數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，匹配度80%以上即可認(rèn)為該細(xì)胞系正確。
本產(chǎn)品會(huì)根據(jù)細(xì)胞是否正在培養(yǎng)、目的地距離等因素確定運(yùn)輸方式：冷凍的細(xì)胞凍存管(干冰)、一小瓶貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞或一小瓶/管懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞(常溫)。為了更好地耐受長(zhǎng)途運(yùn)輸和環(huán)境溫度等變化，對(duì)于正常貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，也可能會(huì)以懸浮的形式培養(yǎng)在細(xì)胞培養(yǎng)瓶或離心管中進(jìn)行運(yùn)輸。
對(duì)于干冰運(yùn)輸?shù)膬龃婕?xì)胞，若干冰已經(jīng)完全融化，請(qǐng)立即將細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)，切勿再次低溫凍存；若尚留有干冰，請(qǐng)直接復(fù)蘇培養(yǎng)或立即將含有細(xì)胞的凍存管放入液氮中保存待用，切不可將細(xì)胞置于高溫環(huán)境。
收到凍存的細(xì)胞后請(qǐng)盡快復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，以確認(rèn)細(xì)胞活力、狀態(tài)并保種。如暫時(shí)不進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80ºC條件下保存2個(gè)月。
每支凍存管約含1×106個(gè)細(xì)胞，體積為0.5-1ml，預(yù)期存活率60-90%，建議復(fù)蘇至1個(gè)6cm培養(yǎng)皿中。如果復(fù)蘇后存活率較低，可以消化后轉(zhuǎn)移至3.5cm培養(yǎng)皿中，這樣細(xì)胞生長(zhǎng)會(huì)更好。
如果本產(chǎn)品是常溫運(yùn)輸，并且是培養(yǎng)瓶中充滿完全培養(yǎng)液的貼壁細(xì)胞，收到細(xì)胞后請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如果細(xì)胞密度超過(guò)85%請(qǐng)盡快進(jìn)行傳代操作；如果懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶置于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以使懸浮的細(xì)胞再次貼壁。如果收到的是常溫運(yùn)輸?shù)碾x心管裝的懸浮細(xì)胞，可以直接取出轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。若培養(yǎng)液顏色正常則保留培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，并且在首次更換培養(yǎng)液時(shí)，保留一半原培養(yǎng)液，并加入一半新鮮培養(yǎng)液，這樣可以盡量避免由于培養(yǎng)液或血清差異導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)的不適應(yīng)，確保細(xì)胞良好的生長(zhǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)請(qǐng)?jiān)谏锇踩衽_(tái)中進(jìn)行操作，并嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作。
請(qǐng)?jiān)谂囵B(yǎng)液中加入適量青霉素-鏈霉素溶液以防止可能的細(xì)菌污染，如青霉素-鏈霉素溶液(100X) (C0222)。
理論上永生化細(xì)胞可無(wú)限傳代，但為了保證細(xì)胞的良好狀態(tài)，建議最早培養(yǎng)的幾代細(xì)胞就凍存一批，并每培養(yǎng)一段時(shí)間后復(fù)蘇早期凍存的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。
接收、處理、保存、丟棄及使用細(xì)胞的時(shí)候要遵守相關(guān)法律法規(guī)，充分考慮可能存在的風(fēng)險(xiǎn)和責(zé)任，采取適當(dāng)?shù)陌踩吞幚泶胧┍M量降低對(duì)健康或環(huán)境的危害。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用說(shuō)明：
1. 細(xì)胞株的復(fù)蘇
a. 將凍存管在37℃水浴鍋中迅速完全融化(保持凍存管的蓋子在液面以上以防止污染)，并適當(dāng)輕輕搖晃促融，切勿vortex。快速、完全融化可以提高細(xì)胞的復(fù)蘇效果。
b. 打開(kāi)凍存管前時(shí)用70%酒精擦拭細(xì)胞凍存管外壁，注意某些記號(hào)筆不耐酒精，小心標(biāo)注的記號(hào)被擦拭掉。
c. 將完全融化的細(xì)胞直接離心，或者轉(zhuǎn)移至無(wú)菌1.5ml或其它合適無(wú)菌離心管中，500g離心2-5min，吸除上清，注意不要吸走細(xì)胞沉淀，然后用新鮮完全培養(yǎng)液重懸后轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)器皿，混勻，置于CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)。
d. 第二天視貼壁或生長(zhǎng)狀態(tài)，更換培養(yǎng)液。
2. 貼壁細(xì)胞的常規(guī)傳代流程
a. 將細(xì)胞培養(yǎng)液、PBS等放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱。
b. 以10cm細(xì)胞培養(yǎng)皿為例。吸出原培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)液，用2-5ml無(wú)菌PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次以去除殘留的血清(如果細(xì)胞貼壁較差，潤(rùn)洗時(shí)要輕柔以避免細(xì)胞飄起)，然后加1-2ml胰酶細(xì)胞消化液(含EDTA)室溫消化，注意消化時(shí)間，通常為1-5分鐘。如果細(xì)胞比較難消化，可以置于37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱一定時(shí)間以加速消化。注意：消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，會(huì)導(dǎo)致傳代后細(xì)胞出現(xiàn)生長(zhǎng)狀態(tài)不良的情況。
c. 每30秒-1分鐘用顯微鏡觀察細(xì)胞消化情況，貼壁細(xì)胞明顯收縮、細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起，并用移液器吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)時(shí)，吸除胰酶細(xì)胞消化液，再加入1-2ml新鮮完全培養(yǎng)液，適當(dāng)晃動(dòng)細(xì)胞皿以終止胰酶作用，用移液器輕輕吹打貼壁的細(xì)胞，獲取細(xì)胞懸液。吹打時(shí)需控制力度，避免產(chǎn)生大量氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~5個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)皿內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)液，置于CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)，第2天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況。
d. 也可以在消化后，加3-5ml完全培養(yǎng)液終止消化，用移液器輕輕吹打細(xì)胞懸液，盡量把細(xì)胞全部吹落、吹散，然后將全部細(xì)胞懸液500g離心2-5min，離心后去上清，再用完全培養(yǎng)液重懸后轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中，添加適量完全培養(yǎng)液，于CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)。
e. 注意培養(yǎng)液的酚紅顏色變化或根據(jù)細(xì)胞的換液要求定期換液，待細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)需要傳代或者凍存。如果沒(méi)有及時(shí)傳代導(dǎo)致細(xì)胞過(guò)密，傳代后細(xì)胞容易出現(xiàn)生長(zhǎng)狀態(tài)不良的情況。
3. 懸浮細(xì)胞的常規(guī)傳代流程
a. 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，500g離心2-5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)液，用吸管小心吹散沉淀，獲取細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2-5個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮完全培養(yǎng)液，置于CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)。
b. 也可以取少量懸浮細(xì)胞直接轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶中，添加適當(dāng)?shù)男迈r完全培養(yǎng)液，置于CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)。
c. 注意培養(yǎng)液的酚紅顏色變化或根據(jù)細(xì)胞的換液要求定期換液，待細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)可以考慮傳代或者凍存。
4. 半貼壁半懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)
a. 若懸浮細(xì)胞較多且折光率良好，可離心收集，繼續(xù)培養(yǎng)。
b. 若僅有少量細(xì)胞懸浮，也可不用收集，傳代操作按常規(guī)貼壁細(xì)胞操作流程處理。
c. 若懸浮細(xì)胞較多，離心收集，原瓶中貼壁細(xì)胞按照常規(guī)貼壁細(xì)胞操作流程進(jìn)行消化、終止消化、吹打，并與之前收集的懸浮細(xì)胞混合，接種到新的細(xì)胞培養(yǎng)皿中。
5. 細(xì)胞株的凍存
a. 按照細(xì)胞傳代方法收集細(xì)胞。
b. 細(xì)胞計(jì)數(shù)：一般要求凍存的細(xì)胞，每毫升的細(xì)胞數(shù)量為1×106-107個(gè)細(xì)胞。
c. 取適當(dāng)細(xì)胞懸液，500g離心2-5min，棄上清，加入細(xì)胞凍存液，重懸，轉(zhuǎn)移到凍存管中，用記號(hào)筆標(biāo)記好細(xì)胞株名稱、凍存日期、代數(shù)等信息，并記錄在相應(yīng)表格中以便管理和快速查找細(xì)胞位置。
d. 將凍存管放入專用的細(xì)胞凍存盒中，-80℃過(guò)夜，然后轉(zhuǎn)移至液氮灌中保存。如果沒(méi)有專用的細(xì)胞凍存盒，可以按下面程序進(jìn)行凍存：4℃ 1h，-20℃ 2h，-80℃過(guò)夜，然后轉(zhuǎn)移至液氮灌中保存。凍存細(xì)胞儲(chǔ)存在-80℃中通常不建議超過(guò)半年，時(shí)間太長(zhǎng)會(huì)影響復(fù)蘇效率。推薦使用的BeyoCool™細(xì)胞凍存盒(FCFC012)。
e. 為保持細(xì)胞的良好狀態(tài)，每隔1年，取出1-2支凍存的細(xì)胞復(fù)蘇一次，并凍存新的細(xì)胞。
