傳代方法	第一次建議1:2傳代	細胞來源	ATCC
細胞描述	STR鑒定正確 這是一個帶有8：21號染色體轉位的白血病細胞株。這個轉位使得AML1基因和ETO (或稱MTG8)基因串聯，使融合基因AML1-ETO (也稱作AML1-MTG或RUNX1-CBF2T1)的表達升高，因而細胞產生嵌合的AML1-ETO蛋白。這個蛋白下調CEBPA mRNA，蛋白和DNA的結合活性，而這種結合對粒性白細胞的分化是極端重要的。這株細胞建立于一位急性白血病患者的外周血。這株細胞髓過氧化物酶陽性，顯示其髓性成熟的形態。 增生試驗顯示，培養的細胞對IL-3、IL-6、G-CSF、GM-CSF有反應，但IL-1或IL-5沒有反應。 注意事項： a) 該細胞復蘇后成活率較低，會出現大量死細胞和死細胞碎片，培養兩周后有所好轉。建議每1-2周對細胞進行1000rpm， 5mins離心，棄掉上清，加入新鮮完全培養液，可以去掉部分細胞碎片和顆粒。培養過程中會出現死細胞和細胞碎片，收到郵寄的活細胞的用戶若發現培養物內有部分死細胞和細胞碎片，此為正常現象。 b) 細胞培養過程中會有輕微聚團，輕輕吹打開即可。當細胞密度較大或者培養液變黃時，需要及時進行半換液或者完全換液。 c) 該細胞對血清質量較為敏感，我庫建議您使用進口大品牌優質血清進行培養。 d) 請注意保持細胞密度在合適的范圍（3x105 ~ 3x106 /ml），不能過稀。 本庫的細胞僅用于科研工作，未經許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫細胞轉讓給第三者。
培養備注	用無菌離心管收集瓶子培養基，留作過渡培養

細胞收到后處理

細胞在培養瓶中培養至良好狀態后灌滿完全培養液并封好瓶口是細胞運輸的最好辦法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內，嚴格無菌操作，培養箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養液收集至離心管中，加入6ml完全培養基，放入37℃、5%CO2孵箱培養；超過80%匯合度時，根據情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養步驟。（注意發貨的是密封培養瓶的話，放入培養箱培養記得培養瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養基，另外一瓶用自己配的完全培養基）

細胞培養步驟

一、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完全培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

a）、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養基終止消化。

3.輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或者瓶中。

b）、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基新皿中或者瓶中。

PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至T25培養瓶或6cm培養皿，加入5ml左右完全培養基混勻，放入培養箱過夜培養后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續培養，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。

三、細胞凍存：（注：非無血清凍存液方法，無血清凍存液方法請參考我司官網貨號：C7001）

1、細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3、用適量的凍存液重懸細胞，并放置于凍存管中；

4、先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃。