傳代方法
第一次建議1:2傳代
凍存條件
細(xì)胞庫無血清凍存液
細(xì)胞描述
該細(xì)胞系培養(yǎng)所用基本培養(yǎng)基為 DMEM/F12,配置完全培養(yǎng)基時需加入 10%FBS, 1ng/ML EGF, 1%ITS, 50 nM Hydrocortisone ,0.01 mM ethanolamine,0.01 mM phosphorylethanolamine,0.5% (w/v) bovine serum albumin,1%Anti-Anti。
本庫的細(xì)胞僅用于科研工作，未經(jīng)許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫細(xì)胞轉(zhuǎn)讓給第三者。
培養(yǎng)備注
用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基，留作過渡培養(yǎng)
培養(yǎng)瓶中細(xì)胞操作步驟
對于貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，寄送前，我們會將培養(yǎng)基充滿整個培養(yǎng)瓶，以減少產(chǎn)品運輸過程中貼壁細(xì)胞的脫落。
1. 收到細(xì)胞產(chǎn)品后，請注意觀察是否有污染。將培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡下仔細(xì)檢查是否渾濁、是否細(xì)菌污染。因在運輸過程中存在顛簸，且有些細(xì)胞對溫度變化也很敏感，可能存在一些細(xì)胞脫落漂浮的情況，這些細(xì)胞仍是活細(xì)胞，請勿丟棄，可離心富集后傳代使用。
2. 對于貼壁的細(xì)胞，在生物安全柜環(huán)境中，用真空泵去除培養(yǎng)瓶中的多余培養(yǎng)基，至剩余5-8mL左右，隨后將細(xì)胞置于含有5%CO的37℃恒溫 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，擰松瓶蓋。如果細(xì)胞已經(jīng)長滿培養(yǎng)瓶請立即傳代。
3. 對于懸浮的細(xì)胞，在生物安全柜環(huán)境中，轉(zhuǎn)移培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞至離心管中，離心200×g / 5 - 10 min，去除上清后，用5 mL培養(yǎng)基吹散細(xì)胞，轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中，隨后置于含有5% CO 的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
凍存細(xì)胞操作步驟
注意：為保存細(xì)胞的高存活率，請收到產(chǎn)品后，立即解凍培養(yǎng)。
1.將凍存管置于37℃ 水浴中來回晃動，迅速解凍。為避免污染，確保凍存管口置于水面之上。解凍需迅速，大約2分鐘。
2. 一旦凍存管中液體融化后，立即取出，采用 70%酒精噴拭凍存管表面。從此步開始，后續(xù)操作須在生物安全柜中完成。
3.將凍存管中的液體轉(zhuǎn)移到含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中， 離心
4. 用完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞并轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶中。為保證細(xì)胞復(fù)蘇的存活率，請將培養(yǎng)基在37℃水浴預(yù)熱后使用將細(xì)胞置于含有5%CO 的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng)
1. 吸取并棄掉培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基，加入PBS清洗一次。
2. 加入 1.0 mL 0.25（w/v）Trypsin-0.53mM EDTA溶液，并置于37℃培養(yǎng)箱中孵育，直至細(xì)胞從壁上脫落分離。此過程大約需要3至5分鐘（此處為12.5 cm2培養(yǎng)瓶所用體積，可根據(jù)實際情況增減用量）。
3. 加入2mL完全培養(yǎng)基中和胰蛋白酶，并輕輕吹打?qū)⒓?xì)胞從培養(yǎng)瓶表面吹落，并使細(xì)胞分散。
4. 離心
5. 將細(xì)胞置于含有5%
傳代比例：建議 1:2 （以培養(yǎng)瓶底面積計算）
培養(yǎng)基換液: 每隔 2 至 3 天。
