| 傳代方法 | 第一次建議1:2傳代 | 傳代情況 | 2~3天換液/傳代 |
| 來源 | 男性肺腺癌肺部組織 | ||
細胞收到后處理
培養至良好狀態后灌滿完全培養液并封好瓶口是運輸細胞的最好辦法。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶，消毒后放到超凈臺內嚴格無菌操作，將細胞瓶放入37℃、5%CO2的培養箱中靜置3-4小時以穩定細胞狀態后再做處理。顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照保存（最好40x,100x,200x各一張），前三天照片是重要售后依據，不提供照片默認收到狀態良好。（傳代后建議一瓶用原瓶的完全培養基，另外一瓶用自己配的完全培養基，以便進行對比培養，換液后擰松瓶蓋）
細胞培養步驟
細胞傳代：如果未超過80%匯合度時，將瓶裝的完全培養液收集至離心管中，留5ml完全培養基，放入37℃、5%CO2孵箱培養；如果細胞密度超80%，即可進行傳代培養，傳代具體步驟如下細胞傳代：
a、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數換液方式，棄半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基新皿中或者瓶中。
b、細胞凍存：
1、細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，將T25 培養瓶中的懸液收集至離心管中1000rpm
離心5min；
2、棄上清，沉淀細胞加入1ml/支的雅吉生物無血清凍存液（C7001），混勻后加入凍存管中。（如：凍一支，加入 1ml 無血清凍存液即可）
3、將凍存細胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要將細胞轉入液氮罐中，需在-80℃冰箱存
放 24 小時以上。
C、細胞復蘇：
1、從液氮中取出細胞凍存管（注意佩戴防護面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 完全培養基的15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、棄上清，沉淀用5ml完全培養基重懸，接種至T25培養瓶，放于37℃,5%CO2細胞培養箱中培養；
4、第二天，換用新鮮完全培養基繼續培養。
注意事項：該細胞難養，收到細胞可按以下方法操作：
半換液處理，豎著培養瓶在培養箱靜置1小時左右，輕輕吸掉3ml左右培養基，然后補給3ml的完全培養基，如果培養基變色慢，可直接加500ul左右FBS，傳代的時候可以直接補給5ml培養基，分兩個培養瓶培養，一般這樣傳代3次左右可以離心傳代一次，去掉死細胞
