產(chǎn)品簡(jiǎn)介：改進(jìn)的異硫氰酸胍/酚一步法（液體樣品專用 TRIzol LS 法）裂解細(xì)胞和滅活RNA 酶， 然后總 RNA 在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜， 再通過(guò)一系列快速的漂洗－離心的步驟, 去蛋白液和漂洗液將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜
質(zhì)去除， 最后低鹽的 RNase free water 將純凈 RNA 從硅基質(zhì)膜上洗脫。
產(chǎn)品特點(diǎn)如下：
1. 離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好。
2. 結(jié)合了異硫氰酸胍/酚一步法試劑穩(wěn)定性好，純度高和離心柱方便快捷的優(yōu)點(diǎn)，不需要異丙醇沉淀和乙醇洗滌過(guò)程，RNA 可以直接從離心柱上洗脫避免了過(guò)度干燥不易溶解問(wèn)題。
3. 獨(dú)有的溶液 A 配方，可直接裂解全血，不需要先裂解去除紅細(xì)胞。
4. 多次漂洗去蛋白過(guò)程，提取 RNA 純度更高。
5. 有效的去除了 5S 在總 RNA 中含量，提高了純度。
運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸和保存，有效期一年。
儲(chǔ)存事項(xiàng)：
1. 因此運(yùn)輸和儲(chǔ)存均在室溫下（15℃－25℃）進(jìn)行。柱式血液 RNAout 溶液 A可以常溫運(yùn)輸，收到后 4℃避光可長(zhǎng)期保存，常溫保存 3 個(gè)月也不影響使用質(zhì)量。
2. 避免試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、PH 值變化，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。
操作步驟：（實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)先閱讀注意事項(xiàng)）
1. 提示：第一次使用前請(qǐng)先在漂洗液 RW 瓶中加入指定量無(wú)水乙醇!
2. 取 0.25 ml 血液（或血清，血漿，腦脊液等等)加入 0.75 ml 柱式血液 RNAout溶液 A，用加樣槍吹打液體樣品幾次以幫助裂解樣品中細(xì)胞。柱式血液RNAout 溶液 A 和液體樣品的終體積比總是 3：1。
3. 將樣品劇烈震蕩混勻后，在室溫靜置 5 分鐘以使核蛋白體完全分解。
4. 加 0.2 ml 氯仿，劇烈振蕩 15 秒并室溫靜置 2 分鐘。
5. 于 4℃ 13,000 rpm 離心 10 分鐘，樣品會(huì)分成三層：下層有機(jī)相，中間層和上層無(wú)色的水相，RNA 存在于水相中。水相層的容量大約為所加 溶液 A體積的 60%，把水相轉(zhuǎn)移到新管中，進(jìn)行下一步操作。
6. 加入 0.5 倍體積無(wú)水乙醇，顛倒混勻（此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)沉淀）。得到的溶液和可能沉淀一起轉(zhuǎn)入吸附柱 RA 中（吸附柱套在收集管內(nèi)）。
7. 室溫（以下步驟均為室溫）13,000 rpm 離心 30 秒，棄掉廢液，將吸附柱重新套回收集管。
8. 加 500 μl 柱式血液 RNAout 溶液 B，12,000 rpm 離心 30 秒，棄掉廢液。
9. 加入 500 μl 漂洗液 RW（請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇!），12,000 rpm 離心 15 秒，棄掉廢液。
10. 重復(fù)一遍步驟 8。
11. 將吸附柱RA放回空收集管中，13,000 rpm 離心2分鐘，盡量除去漂洗液, 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。
12. 取出吸附柱 RA，放入一個(gè) RNase free 離心管中，根據(jù)預(yù)期 RNA 產(chǎn)量在吸附膜的中間部位加 30-50μl RNase free water（事先在 65-70℃水浴中加熱效果更好）， 室溫放置 2 分鐘，13,000 rpm 離心 1 分鐘。如果需要較多 RNA，可將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，離心 1 分鐘，,或者另外再加 30μl RNase free water，離心 1 分鐘，合并兩次洗脫液。
13. 如果需要 RNA 濃度較高，可以適當(dāng)減少洗脫體積， 但是最小體積最好不少于 30μl，體積過(guò)小降低 RNA 洗脫效率，減少 RNA 產(chǎn)量。
注意事項(xiàng)
1. 第一次使用前請(qǐng)先在漂洗液 RW 瓶中加入指定量乙醇，加入后請(qǐng)及時(shí)打鉤標(biāo)記已加入乙醇，以免多次加入!
2. 本試劑盒抑制 RNA 酶效果極佳，所有離心步驟如未加說(shuō)明，均可在常溫進(jìn)行。
3. 柱式血液 RNAout 溶液 A 和柱式血液 RNAout 溶液 B 中含有刺激性有害化合物，操作時(shí)要戴乳膠手套，避免沾染皮膚、眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí)，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。
4. 考慮到環(huán)保問(wèn)題，本試劑盒不含有實(shí)驗(yàn)室常用試劑氯仿，使用前需要自備氯仿。
5. 常規(guī)的瓊脂糖凝膠電泳和變性膠電泳均可以用來(lái)分析 RNA 的質(zhì)量。好的 RNA 產(chǎn)物在電泳后應(yīng)該可以看到明顯的二條優(yōu)勢(shì)核糖體 RNA 帶，分別為~5Kb（28S），~2Kb
（18S），條帶亮度比值約為 2：1。有時(shí)候也可以看到~0.1kb 和 0.3Kb(5S，tRNA)帶。但有時(shí)候根據(jù)不同的物種如某些植物組織可以看到 4，5 條帶也屬于正常現(xiàn)象，如果 RNA 未成熟的前體或者不均一核 RNA、小核 RNA 提取出來(lái)也可能看到介于 7Kb和 15Kb 之間的不連續(xù)的高分子量條帶。
6. 檢測(cè) OD260/OD280 吸光度比值時(shí)，如需稀釋 RNA 樣品應(yīng)該用 TE（PH 8)，如果用水稀釋后檢測(cè)，由于一般水離子強(qiáng)度和 PH 值低，會(huì)使 OD280 升高，從而使比值降低。
7. 加入柱式血液 RNAout 溶液 A 勻漿后，加氯仿前，樣品可在 –60℃-70℃ 保存一個(gè)月以上。
8. 若提取細(xì)菌 RNA，推薦 EASYspin 系列細(xì)菌 RNA 提取試劑盒。
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