細胞名稱：H9
細胞描述：人胚胎干細胞，曾用名WA09
形 態：球形克隆，貼壁生長
來源性別：女性
組織：內細胞團
凍存日期/代數：詳見 凍存管/培養瓶 標識
建議復蘇培養體系：1 個 T25 培養瓶或6cm培養皿
細胞狀態：良好
支原體檢測結果：陰性
細胞用途：僅供科研使用。
STR鑒定結果：
Amelogenim：X
D5S818：11，12
D13S317：9
D7S820：9，11
D16S539：12，13
vWA：17
THO1：9
TPOX：10,11
CSF1PO：11
H9細胞完全培養基培養人胚胎干細胞
1.試劑和材料
H9細胞完全培養基試劑盒
成分
規格
數量
儲存條件
H9細胞基礎培養基
500mL
1瓶
2-8℃
H9細胞培養基添加劑
5mL復溶
1支
-20℃
所需的其它試劑和材料
產品
規格
Y27632
1mg
Matrix
5mL
H9細胞消化液
500mL
另需細胞培養皿/瓶/板，15mL離心管和移液管等細胞培養耗材
2.培養流程
2.1.復蘇
在開始復蘇前，將所有試管、預熱后的培養基和培養皿準備好，已確保盡快完成復蘇過程。
1. 將凍存管從液氮中取出，快速在37℃水浴槽中解凍，輕柔持續地搖動凍存管，直到只剩下一個小冷凍團。從水浴槽取出凍存管，70%乙醇擦拭進行消毒。
2. 使用移液管將凍存管中含有H9細胞的凍存液輕輕轉移至一個含有5-6mL已經預熱的完全培養基的15mL離心管中，過程必須輕柔防止吹散細胞團。
3. 室溫300g離心5min。
4. 吸出培養基，確保細胞團完整。
5. 然后緩慢加入1mL完全培養基，用手指輕彈離心管底部，使細胞團脫離底部并分散。
6. 輕輕的將此1mL細胞懸液轉移至已包被的培養皿/板/瓶，根據最終培養細胞的液體體積，加入ROCK inhibitor Y27632，終濃度為10μM。
7. 將培養皿/板/瓶置于37℃培養箱中，每天更換培養基（換液不需要再添加Y27632，但培養基需提前預熱）。
2.2.傳代
當集落變得較大、中心變得密集、明亮（對比邊緣），相鄰的集落開始融合時，此時可進行傳代。
1. 傳代前， 準備 37 ℃預熱好的好無鈣鎂 PBS 溶液及消化液，完全培養基。
2. 吸走上清，并加入 37℃預熱好的 PBS 溶液清洗1次。
3. 加入適量（按 6 孔板每孔加 1ml，6cm 皿加 2ml，10cm 皿加 3ml 的量）的 37℃預熱好的消化液。
4. 37℃放置1-2min，用手指輕彈皿/板/瓶身，顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣開始脫離培養皿/板底，克隆內部大部分細胞成團脫落。
5. 加入適量的完全培養基終止消化。
6. 移入離心管，300g離心5min，
7. 離心后重懸（重懸步驟參照復蘇4-5步）。
8. 傳代比例為 1：6—1：8，根據最終培養細胞的液體體積，加入ROCK inhibitor Y27632，終濃度為10μM。
9. 將培養皿/板/瓶置于37℃培養箱中，每天更換培養基（換液不需要再添加Y27632，但培養基需提前預熱）。
2.3.凍存
當集落變得較大、中心變得密集、明亮（對比邊緣），相鄰的集落開始融合時，此時可進行傳代。
1. 傳代前， 準備 37 ℃預熱好的好無鈣鎂 PBS 溶液及消化液，完全培養基。
2. 吸走上清，并加入 37℃預熱好的 PBS 溶液清洗1次。
3. 加入適量（按 6 孔板每孔加 1ml，6cm 皿加 2ml，10cm 皿加 3ml 的量）的 37℃預熱好的消化液。
4. 37℃放置1-2min，用手指輕彈皿/板/瓶身，顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣開始脫離培養皿/板底，克隆內部大部分細胞成團脫落。
5. 加入適量的完全培養基終止消化。
6. 移入離心管，300g離心5min。
7. 離心后重懸（重懸步驟參照復蘇4-5步）。
8. 使用預冷的凍存液輕輕的重懸細胞團，然后將細胞懸液轉移至凍存管，凍存按 6 孔板每孔凍 1 支，6cm 皿凍 2-4 支，10cm 皿凍 6-12 支（凍存液為：90%H9細胞完全培養基與 10%的DMSO。
注意事項1.收到細胞后，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。
2.收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置2-4小時（視細胞密度而定）穩定細胞狀態。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態，100*，200*各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據。
3.由于細胞狀態受環境、操作和運輸等多方面因素影響，故本公司只保證客戶收到細胞后一周內的細胞狀態，故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發現問題后客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天。
4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
