培養條件：
| 培養條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ | ||
| 傳代方法 | 第一次建議1:2傳代 | 傳代情況 | 2天換液 |
| 備注 | 建議同時購買完培，同時購買非常優惠 要培養HepaRG細胞以模擬肝癌的發展，可以遵循以下步驟： 細胞復蘇和培養： 使用HepaRG™ Thaw, Plate & General Purpose Medium復蘇HepaRG細胞。 將復蘇后的細胞按照指定的細胞濃度和體積接種到培養板或培養瓶中。 細胞分化： 根據HepaRG細胞用戶指南，HepaRG細胞在培養過程中會自然分化。 為了模擬肝癌的發展，可以通過改變培養條件來誘導細胞分化或保持未分化狀態。例如，通過添加特定的誘導介質，如HepaRG™ Serum-free Induction Medium或HepaRG™ Induction Medium，可以誘導細胞分化。 模擬肝癌發展： 通過引入致癌基因，如c-MYC，可以使HepaRG細胞形成的肝類器官在體外逐步呈現肝細胞癌（HCC）的結構和功能。 通過向肝類器官中引入ICC（膽管細胞癌）的致癌因子，如RAS等突變基因，可以使得重編程的肝細胞轉化為ICC。 細胞生物學測定： 使用d-/nd-HepaRG細胞和人肝癌/肝癌細胞系進行細胞生物學測定，以表征良性/惡性表型。 將d-/nd-HepaRG對幾種肝臟生長因子和非基因毒性致癌物（NGC）的反應與離體培養中未改變和癌前大鼠肝細胞進行比較。 酶誘導檢查： 通過RT-qPCR/oligo-array檢查NGC的酶誘導。 觀察和分析： 觀察nd-HepaRG的生長、貼壁獨立性、遷移、克隆性和體內致瘤性，這些特性介于良性d-HepaRG和惡性肝癌細胞之間。 | ||
細胞收到后處理
培養至良好狀態后灌滿完全培養液并封好瓶口是運輸細胞的最好辦法。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶，消毒后放到超凈臺內嚴格無菌操作，將細胞瓶放入37℃、5%CO2的培養箱中靜置3-4小時以穩定細胞狀態后再做處理。顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照保存（最好40x,100x,200x各一張），前三天照片是重要售后依據，不提供照片默認收到狀態良好。
細胞培養步驟
a、細胞傳代：如果未超過80%匯合度時，將瓶裝的完全培養液收集至離心管中，留5ml完全培養基，放入37℃、5%CO2孵箱培養；如果細胞密度超80%，即可進行傳代培養。
貼壁細胞傳代步驟如下：
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液約1-2ml至培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加5ml以上完全培養基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，使之完全脫落后吸出，然后將懸液轉移至15ml離心管中，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL完全培養基重懸。
4. 將細胞懸液按1：2的比例進行分瓶傳代（兩個T25瓶），補充新的完全培養基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的細胞培養箱中培養。
懸浮細胞傳代步驟日下：
1、半換液法
半換液處理，豎著培養瓶在培養箱靜置1小時左右，輕輕吸掉3ml左右培養基，然后補給3ml的完全培養基，如果培養基變色慢，可直接加500ul左右FBS，傳代的時候可以直接補給5ml培養基 分兩個培養瓶培養，一般這樣傳代3次左右可以離心傳代一次，去掉死細胞。
2、離心換液法
如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
b、細胞凍存：
1、細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄T25培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入5ml完全培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心 5min；
3、 棄上清，沉淀細胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液（貨號：C7001），混勻后加入凍存管中。
4、 將凍存細胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要將細胞轉入液氮罐中，則需在-80℃冰箱 中存放24小時以上再轉入液氮罐中。
C、細胞復蘇：
1、從液氮中取出細胞凍存管（注意佩戴防護面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 完全培養基的15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、棄上清，沉淀用5ml完全培養基重懸，接種至T25培養瓶，放于37℃,5%CO2細胞培養箱中培養；
4、第二天，換用新鮮完全培養基繼續培養。
注意事項：有些細胞貼壁不牢，在運輸過程中容易發生細胞脫落，這是正常現象。如脫離較多可將培養瓶所有培養液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過渡培養（后期對比培養），沉淀加入胰酶1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml完全培養基終止反應。再離心，棄上清，加1-2ml完全培養基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的完全培養基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2細胞培養箱中培養。
