傳代方法	1:2傳代
傳代情況	2~3天換液
培養體系	溫度：37℃ ；  氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞描述	本庫的細胞僅用于科研工作，未經許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫細胞轉讓給第三者。
凍存條件	完全培養基50%+40%FBS+10%DMSO，液氮

二、細胞收到后處理

細胞在培養瓶中培養至良好狀態后灌滿完全培養液并封好瓶口是細胞運輸的最好辦法。

收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內，

嚴格無菌操作，培養箱靜置 2-4 小時。鏡下觀察：未超過 80%匯合度時，可將瓶裝的完全培

養液收集至離心管中，加入 6ml 完全培養基，放入 37℃、5%CO2 孵箱培養；超過 80%匯合度

時，根據情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養步驟。（注意發貨的是密封培養瓶的話，

放入培養箱培養記得培養瓶蓋子擰松）

三、細胞培養步驟

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入 5mL 培養基

混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 5 分鐘，棄去上清液，補加 4-6mL 完全培養基后吹勻。然

后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入 6cm 皿中），培養過夜。第二

天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。

1、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1.

棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2.

加 1-2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培養箱中消化

1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，

輕敲幾下培養瓶后加 5ml 以上含 10%血清的完全培養基終止消化。

3.輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出，在 1000RPM 條件下離心 8-10 分鐘，棄去上清液，補加

1-2mL 培養液后吹勻。

4. 按 5-6ml/瓶補加培養液，將細胞懸液按 1：2 的比例分到新的含 5-6 ml 培養液的新皿中

或者瓶中。

PS：若客戶收到 2ml 小管細胞，收到細胞后，用 75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或

安全柜內，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至 T25 培養瓶或 6cm 培養皿，加入 5ml 左右完

 

備注

用無菌離心管收集瓶子培養基，留作過渡培養

- 2 -

全培養基混勻，放入培養箱過夜培養后查看細胞密度：若密度未超過 80%，換液繼續培養，

視情況傳代或者凍存。若密度超過 80%，可直接進行傳代（方法同上）。

3）細胞凍存：

1、細胞生長至覆蓋培養瓶的 80%面積時，棄 25cm2 培養瓶中的培養液，用 PBS 清洗細胞一

次；2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變

圓后加入完全培養液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至 15ml 離心管中，

1000rpm 離心 5min；

3、用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4、先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃。

售后服務告知書

一、收到細胞處理方法

1. 收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置若干小時（視細胞密度而定）穩

定細胞狀態。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收

細胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下

細胞狀態，100×，200×各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方

進行售后的依據。

2.

收到細胞未開封，出現污染狀況我們負責免費重發一次細胞。

3.

由于細胞狀態受環境、操作和運輸等多方面因素的影響，故本公司只保證客戶收到細胞

后一周內的細胞狀態，故客戶需要售后是需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和

發現問題后與客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于 7 天。

4. 如客戶對細胞的種類、純度、活性等特性有疑問，需提供相應的生物學實驗檢測結果作

為依據。

二、細胞出現問題，可重發的情況有哪些？判定標準是什么？

1.

細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養液嚴重漏液等，重發；

2.

細胞污染問題，請在收到產品 48 小時內，給我們提出真實的實驗結果，核實后重發；

3.

常溫發貨的細胞靜置 24 小時后，干冰凍存發貨的細胞復蘇后 24 小時后，絕大多數細胞

未存活，（需提供真實清晰的細胞狀態照片），重發；

4. 干冰凍存發貨的細胞復蘇后 24 小時后或常溫發貨的細胞靜置 4 小時候并且未開封，出現

污染，重發；

5. 細胞活性問題，請在收到產品 7 天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定

細胞活力，核實后予重發；

6. 細胞收到當天以及第 2,3 天請拍照，3 天未告知的，視為產品合格。4-7 天內出現問題有

提供收到細胞前 3 天照片和細胞出現問題時照片以及細胞相關操作的詳細步驟的，并跟技術

人員溝通的，由技術人員判定為我方責任的，重發。技術人員判定為雙方承擔責任的由雙方

進行協商處理或者按合同價的 50%收費重發。

三、細胞出現問題，不予以重發的情況有哪些？

1.

客戶造成細胞污染，不重發；

2.

客戶不正確操作致細胞狀態不好，不重發；

3.

非本庫推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好，不重發；

4.

細胞狀態不好，未提供細胞培養前 3 天照片的，不重發

- 3 -

5.

細胞培養時經其它處理的，不重發；

6.

細胞收到 2 天內，未告知，不重發；

7.

視具體情況而定。