細胞名稱：DYR0100

細胞描述：將人包皮細胞誘導成 iPS 細胞，通過重編程轉錄因子為：OCT4、SOX2、KLF4、MYC 誘導建立 iPS 細胞，培養時無需飼養層細胞。

形 態：球形克隆

來源性別：男性疾 病：健康

年 齡：新生兒

細胞來源：從 ATCC 引進（http://www.atcc.org/）

ATCC number: ACS-1011TM

凍存日期/代數：詳見 凍存管/培養瓶 標識建議復蘇培養體系：1 個 T25 培養瓶

細胞狀態：良好

支原體檢測結果：陰性

細胞用途：僅供科研使用。

STR鑒定結果

D5S818	11	11
D13S317	11	13
D7S820	9	10
D16S539	12	12
VWA	14	19
TH01	9.3	9.3
AMEL	X	Y
TPOX	8	11
CSF1PO	7	11
D12S391	18	19.3
FGA	21	22
D2S1338	17	19

iPS細胞完全培養基培養人誘導型多能干細胞

1.試劑和材料

iPS細胞完全培養基試劑盒

成分	規格	數量	儲存條件
iPS細胞基礎培養基	500mL	1瓶	2-8℃
iPS細胞培養基添加劑	20mL	1支	-20℃

所需的其它試劑和材料

產品	規格	貨號	品牌
Y27632	1mg	iPSMed-iCell-CA005	iCell
Matrix	5mL	iPSMed-iCell-CA004	iCell
iPS細胞消化液	500mL	iPSMed-iCell-CA003	iCell
另需細胞培養皿/瓶/板，15mL離心管和移液管等細胞培養耗材

2.培養流程

2.1.復蘇

在開始復蘇前，將所有試管、預熱后的培養基和培養皿準備好，已確保盡快完成復蘇過程。

將凍存管從液氮中取出，快速在37℃水浴槽中解凍，輕柔持續地搖動凍存管，直到只剩下一個小冷凍團。從水浴槽取出凍存管，70%乙醇擦拭進行消毒。

使用移液管將凍存管中含有iPS細胞的凍存液輕輕轉移至一個含有5-6mL已經預熱的完全培養基的15mL離心管中，過程必須輕柔防止吹散細胞團。

室溫300g離心5min。

吸出培養基，確保細胞團完整。

然后緩慢加入1mL完全培養基，用手指輕彈離心管底部，使細胞團脫離底部并分散。

輕輕的將此1mL細胞懸液轉移至已包被的培養皿/板/瓶，根據最終培養細胞的液體體積，加入ROCK inhibitor Y27632，終濃度為10μM。

將培養皿/板/瓶置于37℃培養箱中，每天更換培養基（換液不需要再添加Y27632，但培養基需提前預熱）。

2.2.傳代

當集落變得較大、中心變得密集、明亮（對比邊緣），相鄰的集落開始融合時，此時可進行傳代。

傳代前， 準備 37 ℃預熱好的好無鈣鎂 PBS 溶液及消化液，完全培養基。

吸走上清，并加入 37℃預熱好的 PBS 溶液清洗1次。

加入適量（按 6 孔板每孔加 1ml，6cm 皿加 2ml，10cm 皿加 3ml 的量）的 37℃預熱好的消化液。

37℃放置1-2min，用手指輕彈皿/板/瓶身，顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣開始脫離培養

皿/板底，克隆內部大部分細胞成團脫落。

加入適量的完全培養基終止消化。

移入離心管，300g離心5min，

離心后重懸（重懸步驟參照復蘇4-5步）。

傳代比例為 1：6—1：8，根據最終培養細胞的液體體積，加入ROCK inhibitor Y27632，終濃度為10μM。

將培養皿/板/瓶置于37℃培養箱中，每天更換培養基（換液不需要再添加Y27632，但培養基需提前預熱）。

2.3.凍存

當集落變得較大、中心變得密集、明亮（對比邊緣），相鄰的集落開始融合時，此時可進行傳代。

傳代前， 準備 37 ℃預熱好的好無鈣鎂 PBS 溶液及消化液，完全培養基。

吸走上清，并加入 37℃預熱好的 PBS 溶液清洗1次。

加入適量（按 6 孔板每孔加 1ml，6cm 皿加 2ml，10cm 皿加 3ml 的量）的 37℃預熱好的消化液。

37℃放置1-2min，用手指輕彈皿/板/瓶身，顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣開始脫離培養皿/板底，克隆內部大部分細胞成團脫落。

加入適量的完全培養基終止消化。

移入離心管，300g離心5min。

離心后重懸（重懸步驟參照復蘇4-5步）。

使用預冷的凍存液輕輕的重懸細胞團，然后將細胞懸液轉移至凍存管，凍存按 6 孔板每孔凍 1 支，6cm 皿凍 2-4 支，10cm 皿凍 6-12 支（凍存液為：90% iPS細胞完全培養基與 10%的DMSO。